細(xì)胞培養(yǎng)與支原體污染

支原體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)帶來嚴(yán)重的危害，同時(shí)，它的發(fā)生率較高，肉眼不易察覺。

有報(bào)道，在細(xì)胞培養(yǎng)室中，它的平均發(fā)生率甚至可高達(dá)63%。在生物制品中，它的發(fā)生率為1%~3%。

細(xì)胞培養(yǎng)中支原體的來源

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，污染細(xì)胞的支原體主要有5個(gè)方面的可能來源：

1. 環(huán)境

2. 被污染的細(xì)胞

3. 人體表面的攜帶（如口腔、鼻腔、皮膚等）

4. 實(shí)驗(yàn)試劑，如培養(yǎng)基、胰酶等

5. 未*消毒的實(shí)驗(yàn)器具

其中，環(huán)境是造成支原體污染的一個(gè)主要原因。

特別是多人培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)共用同一培養(yǎng)箱、同一操作臺(tái)，即使其中一個(gè)人很注意，但如果其他實(shí)驗(yàn)者給環(huán)境中帶進(jìn)支原體，以及培養(yǎng)箱箱門打開頻繁，也會(huì)顯著增加細(xì)胞中出現(xiàn)支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此環(huán)境預(yù)防遠(yuǎn)比在培養(yǎng)液中加入抗支原體藥物重要。

處理細(xì)胞培養(yǎng)工作區(qū)域的支原體

這里的工作區(qū)域包括實(shí)驗(yàn)臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱（水槽除外）、液氮罐、移液器、門把手等細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境。

使用德國MB公司生產(chǎn)的支原體祛除噴霧或濕巾（品名：Mycoplasma-off™），可在5-10分鐘清除支原體，高效快速，操作方便。

產(chǎn)品特點(diǎn)及原理：

1）快速有效

噴霧劑和濕巾中含有支原體專用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。

與傳統(tǒng)的化學(xué)試劑熏蒸方法相比，更加安全；與傳統(tǒng)酒精處理、紫外線照射方法相比更有效！

2）廣譜抗菌

不僅能祛除支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3）無腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無腐蝕性和致癌性成分。

4）操作簡便

即用型消毒液，可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

使用方法及步驟：

 

噴霧劑:

注：對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)箱，內(nèi)部噴灑支原體祛除噴霧或用濕巾擦拭后，應(yīng)打開箱門通風(fēng)至少1小時(shí)。如培養(yǎng)箱帶熱滅活功能，可開啟該功能以替代風(fēng)干。

 

濕巾:

對(duì)于移液器，門把手，電子設(shè)備等，可使用支原體祛除濕巾。擦拭后，應(yīng)讓其被消毒物體的表面保持濕潤，再讓其自然風(fēng)干。

培養(yǎng)箱水槽和水浴鍋中預(yù)防支原體污染的方法

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋經(jīng)常會(huì)有支原體以及各種細(xì)菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時(shí)，水槽中的水源即會(huì)成為細(xì)胞污染的重要來源。

保持水槽的潔凈，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的順利進(jìn)行非常重要。

推薦眾多實(shí)驗(yàn)室日常都在使用德國MB公司生產(chǎn)的Water Shield支原體污染防護(hù)劑（水槽用）。Water Shield可持續(xù)作用四周，使水源避免受到支原體、細(xì)菌、酵母、霉菌和孢子的污染。

 

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1）長效。Water Shield含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑，不易揮發(fā)，可持續(xù)作用4周。

2）安全。不含醛類或疊氮化物，對(duì)細(xì)胞無毒害。

3）廣譜。預(yù)防支原體、細(xì)菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4）方便。Water Shield按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

5）不產(chǎn)生水垢。

操作步驟：

1）Water Shield和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

2）Water Shield按1:200比例使用，例如：1000ml蒸餾水+5ml Water Shield，或10L蒸餾水+50ml Water Shield。

3）4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield。

 

注意事項(xiàng)：

避免吸入。眼睛接觸或長時(shí)間皮膚接觸可能會(huì)產(chǎn)生刺激性。因而，使用試劑時(shí)應(yīng)戴上護(hù)目鏡和一次性手套。一旦皮膚接觸，應(yīng)用大量水沖洗。

Water Shield對(duì)玻璃、陶瓷、塑料、橡膠、鋼制品、貴金屬和其他金屬安全性良好。